EXPRESIÓN DEL TRANSGÉN SINTÉTICO Lac2 DE Gaeumannomyces graminis var. graminis EN Escherichia coli Y Pichia pastoris

LOYA HERNÁNDEZ, ARLETT FABIOLA (2022) EXPRESIÓN DEL TRANSGÉN SINTÉTICO Lac2 DE Gaeumannomyces graminis var. graminis EN Escherichia coli Y Pichia pastoris. Maestría thesis, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA.

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Resumen

La búsqueda de nuevas tecnologías ecológicas y eficientes para reemplazar los métodos convencionales no sostenibles de degradación de contaminantes en efluentes de aguas residuales ha aumentado el interés en la investigación enzimática. En este contexto, las enzimas lacasa (EC1.10.3.2) son agentes catalizadores biológicos y benignos útiles para la biorremediación al degradar los compuestos tóxicos como compuestos fenólicos y no fenólicos, utilizando oxígeno molecular mediante un mecanismo catalizado por radicales, en otros metabolitos intermedios menos tóxicos o inocuos. Dado que la búsqueda de fuentes de enzimas lacasa con actividad eficiente se torna apremiante, en este estudio titulado: “Expresión del transgén sintético Lac2 de Gaeumannomyces graminis var. graminis en Escherichia coli y Pichia pastoris”, se realizó la clonación del transgén Lac2 que codifica la enzima lacasa mediante herramientas de ingeniería genética en el vector pET32a(+)® y pPICZαA® para su expresión en E. coli y P. pastoris, respectivamente. Se determinó que la lacasa recombinante Lac2 expresada en E. coli y P. pastoris con un peso molecular aparente de 64 kDa y 73 kDa, debido a las glicosilaciones, exhibe la actividad enzimática más alta en pH de 5.0 y 5.5 a una temperatura de 60 y 30 °C, respectivamente, con ABTS (ácido 2,2-azino-bis- (3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico)) como sustrato. El análisis en presencia de iones metálicos muestra que la actividad de Lac2 recombinante aumentó con 10 mM de Cu2+ y Fe3+. Además, Lac2 recombinante presentó la capacidad de degradar más del 70% de colorante verde de malaquita sin la adición de algún mediador redox, lo que reduce la probabilidad de producir metabolitos que puedan ser más tóxicos que el mismo colorante. Hasta donde sabemos, este es el primer reporte de expresión de la proteína lacasa de Gaeumannomyces graminis var. graminis en E. coli y P. pastoris; por lo que los resultados obtenidos en la presente investigación se suman a resultados obtenidos con lacasas de otros organismos, las cuales pueden ser optimizadas para utilizarse en la industria bioenergénica o en bioremediación; además, estos resultados permitirán escalar la producción de lacasas en plantas para evaluar disminuciones de lignina en paredes celulares.

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