OBTENCIÓN DE SACAROSA ISOMERASA PALI NX-5 APTA PARA USO INDUSTRIAL MEDIANTE TÉCNICAS DE INGENIERÍA DE PROTEÍNAS

SARDIÑA PEÑA, AMADO JAVIER (2024) OBTENCIÓN DE SACAROSA ISOMERASA PALI NX-5 APTA PARA USO INDUSTRIAL MEDIANTE TÉCNICAS DE INGENIERÍA DE PROTEÍNAS. Doctorado thesis, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA.

Vista Previa

Text Tesis Amado Javier Sardiña Peña.pdf Download (11Mb) | Vista Previa

Resumen

La sacarosa, principal edulcorante comercializado en México, al ser consumida genera picos en el índice glucémico que inciden negativamente en la salud poblacional. Dadas sus propiedades prometedoras, la isomaltulosa constituye una alternativa al uso de la sacarosa. Las sacarosa isomerasas son las enzimas utilizadas en la producción de isomaltulosa; sin embargo, su baja estabilidad térmica constituye un limitante. Para aumentar la estabilidad térmica de la sacarosa isomerasa de Erwinia rhapontici NX-5, se diseñó una estrategia integral que combina diferentes elementos termoestabilizadores. Se identificaron 19 residuos de aminoácidos de alto valor B (51.75-47.01) para mutagénesis dirigida. También se llevó a cabo una evaluación in silico de la influencia de las mutaciones sobre la interacción enzima-sustrato. Las variantes de sacarosa isomerasa se expresaron en Komagataella phaffii X33. Así, por primera vez, en esta investigación se reporta la expresión y caracterización de una sacarosa isomerasa glicosilada. Los mutantes diseñados, K174Q, L202E y K174Q/L202E, mostraron un aumento en su temperatura óptima de 5 °C, mientras que sus vidas medias aumentaron 2.21, 1.73 y 2.89 veces, respectivamente. Los mutantes mostraron un aumento en la actividad del 20.3% hasta el 25.3%. Asimismo, los valores de Km para los mutantes K174Q, L202E y K174Q/L202E disminuyeron un 5.1, 7.9 y 9.4%, respectivamente; además, la eficiencia catalítica aumentó hasta un 16%. Con la estrategia integral seguida, se obtuvieron mutantes más adecuados para aplicaciones industriales que sus contrapartes: no mutada (esta investigación) y silvestre de E. rhapontici NX-5; esto, sin comprometer la actividad catalítica de la molécula.

Actions (login required)

Ver Objeto