EL miRNA bta-miR19a REGULA LA EXPRESIÓN GÉNICA DEL GEN DICER

TORRES GARCÍA, ANA KAREN (2016) EL miRNA bta-miR19a REGULA LA EXPRESIÓN GÉNICA DEL GEN DICER. Maestría thesis, UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA.

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Resumen

La activación del genoma embrionario implica la degradación masiva de los RNAm almacenados durante la ovogénesis por acción de microRNAs. El objetivo del presente estudio fue demostrar que Dicer es un RNAm que es regulado por un miRNA. Para lo cual se realizó cultivo de células de la granulosa, se incubaron a 38.5 °C con una atmósfera de 5 % de CO2, el medio se cambió a las 18 h. Al término de las 48 h de cultivo se llevó a cabo la transfección del bta-miR-19a, utilizando diferentes concentraciones: 10 nM, 30 nM y 50 nM, a las 5 h de transfección se reemplazó el medio para mantener el cultivo celular durante 48 h a 38.5 °C con 5 % de CO2. Se retiraron las células empleando tripsina y se procedió a la extracción de RNA y síntesis de cDNA para seguir con el análisis por PCR en tiempo real, utilizando como gen interno RNA 18S. Se observó que a mayor concentración del bta-miR-19a, es menor la expresión de Dicer. Además se realizó la extracción de proteínas provenientes de cada tratamiento del cultivo, empleando el reactivo CelLytic M™ (Sigma), para evaluar la expresión de Dicer a nivel de proteína. El ensayo de western vii blot demostró que la presencia de la proteína DICER se ve regulada por la acción del bta-miR-19a en el cultivo, afectando en mayor proporción a una concentración de 50 nM. Los resultados demuestran que el miR-19a regula la expresión de Dicer, tanto a nivel de RNAm y proteína.

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